關(guān)于乳腺癌分型

根據(jù)風(fēng)險、預(yù)后和對治療反應(yīng)的可能性，乳腺癌可分為四個亞型：Luminal A、Luminal B、HER2過表達(dá)型和三陰型（Basal-like型）。Luminal的特征是雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）的表達(dá)以及其他相關(guān)基因；HER2基因在約15%的浸潤性乳腺癌中被擴(kuò)增，該亞型部分已被證明表達(dá)ER，但大多數(shù)HER2富集的腫瘤缺乏ER或PR的表達(dá)，HER2富集的腫瘤通常是高級別腫瘤；Basal則大量表達(dá)上皮基因，如細(xì)胞角蛋白5和17，但ER、PR和HER2的表達(dá)有所缺失。

當(dāng)前乳腺癌細(xì)胞系和腫瘤之間分型方案的比較^[1] 

乳腺癌的嚙齒類動物模型已成為研究乳腺癌進(jìn)展、轉(zhuǎn)移機(jī)制和遺傳途徑，以及開發(fā)、評估臨床治療方法的重要工具。選擇合適的動物模型是研究的關(guān)鍵，我們需要基于對不同模型優(yōu)缺點的整合，使其符合特定研究目的。 

（1）CDX模型

將人類腫瘤細(xì)胞系移植到免疫缺陷小鼠中，可分為皮下接種模型和乳墊接種模型。CDX模型細(xì)胞系是來自各種人類腫瘤類型的代表，遺傳信息穩(wěn)定；其間質(zhì)細(xì)胞和血管細(xì)胞組成腫瘤微環(huán)境的特征穩(wěn)定；腫瘤便于精確測量。但皮下位置可能不允許關(guān)鍵組織特異性的培養(yǎng)間質(zhì)浸潤；存在跨物種分裂，即基質(zhì)組件是鼠源的，腫瘤細(xì)胞是人類的；且缺乏免疫環(huán)境。 

賽業(yè)生物對人源腫瘤細(xì)胞做了大量的熒光報告基因的轉(zhuǎn)入工作，為的是提供更接近臨床的轉(zhuǎn)移瘤模型和原位模型。 

（2）同源移植模型

鼠源性腫瘤異體移植到免疫活性小鼠中，可分為皮下接種模型和乳墊接種模型。同源移植存在完全的免疫系統(tǒng)；其間質(zhì)細(xì)胞和血管細(xì)胞組成腫瘤微環(huán)境的特征穩(wěn)定；且腫瘤內(nèi)的所有細(xì)胞類型都來自小鼠。但細(xì)胞系種類較少；小鼠免疫源加強(qiáng)，腫瘤移植后會消退；且增殖過快，影響給藥窗口期。 

（3）PDX模型

將人類乳腺癌細(xì)胞或組織從原發(fā)性腫瘤（在乳房腫塊切除術(shù)或乳房切除術(shù)期間采集）或轉(zhuǎn)移性病變原位移植到免疫功能低下小鼠的乳腺脂肪墊中。PDX在連續(xù)傳代中高度模擬了親代腫瘤的組織學(xué)、基因組和結(jié)構(gòu)特征；且腫瘤便于精確測量。但生成自發(fā)PDX轉(zhuǎn)移模型需要高超的技術(shù)專長；從頭開始建立PDX模型非常耗時；為了捕捉在臨床上觀察到的患者間異質(zhì)性，研究人員應(yīng)考慮使用PDX模型庫，而不是單一獨立的模型。 

未經(jīng)任何有意識的人工處理而自然發(fā)生乳腺癌的小鼠為自發(fā)型，多采用近交系小鼠，如SHN和C3H等。其中SHN小鼠較為常用，一般出生后4個月就開始出現(xiàn)腫瘤癥狀，到12個月時乳腺癌患病率高達(dá)100%，其腫瘤發(fā)生與人類乳腺癌極為相似，但成瘤時間太長，且腫瘤發(fā)生不同步，不能在短期內(nèi)獲得大量的具有統(tǒng)計學(xué)意義的實驗數(shù)據(jù)。 

誘發(fā)性乳腺癌模型多采用化學(xué)誘發(fā)途徑，常用的誘導(dǎo)劑有甲基亞硝基脲（N-methyl-N-nitrosourea, MNU）或DMBA等，一般通過灌胃、局部涂抹或靜脈注射等途徑作用于實驗動物，多是采用大鼠。該方法模型構(gòu)建周期較長，腫瘤細(xì)胞差異性大，惡性行為有限，腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力較弱，不利于研究惡性乳腺癌發(fā)病機(jī)理。 

由乳腺癌患者的胸腔積液中分離建立，常用于發(fā)病機(jī)理的研究。MCF7屬于貼壁細(xì)胞，顯微鏡下呈上皮細(xì)胞形態(tài)，且保留了多個分化乳腺上皮的特性，ER（+）、PR（+）、P53（+/-）；WT表達(dá)WNT7B；表達(dá)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白（IGFBP）BP-2、BP-4、BP-5；TNF-α可以抑制MCF-7細(xì)胞的生長。 

來自轉(zhuǎn)移乳腺腺癌患者的胸水，常用于乳腺疾病的發(fā)病機(jī)理及臨床應(yīng)用研究。MDA-MB-231屬上皮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)大部分為紡錘狀，也有部分細(xì)胞呈圓形，存在少量懸浮細(xì)胞。ER（-）、PR（-）、HER2（-）、TP53++M；貼壁生長；表達(dá)表皮生長因子EGF受體、轉(zhuǎn)化生長因子TGF-α受體和WNT7B癌基因。 

細(xì)胞是由E·Lasfargues和W·G·Coutinho從一個實心的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中分離到的細(xì)胞株。呈上皮細(xì)胞樣，ER（+）、PR（+）、HER2（+）、TP53+。 

1.基于C-NKG重度免疫缺陷小鼠的CDX模型構(gòu)建

乳腺癌細(xì)胞MCF-7乳墊原位移植腫瘤及體重生長曲線 

接種細(xì)胞前24小時，體內(nèi)接種雌激素緩釋片，將細(xì)胞以乳墊原位注射的形式接種到C-NKG小鼠體內(nèi)，并在不同的時間點測量成瘤體積。細(xì)胞接種量為5×10⁶/只，數(shù)據(jù)以Mean±SEM形式呈現(xiàn)。結(jié)果顯示在C-NKG小鼠體內(nèi)腫瘤曲線穩(wěn)定，容易成瘤。 

乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231乳墊原位移植腫瘤及體重生長曲線 

將細(xì)胞以乳墊原位注射的形式接種到C-NKG和NOD-Scid小鼠體內(nèi)，并在不同的時間點測量成瘤體積。細(xì)胞接種量為1×10⁷/只，數(shù)據(jù)以Mean±SEM形式呈現(xiàn)。結(jié)果顯示在C-NKG小鼠體內(nèi)腫瘤曲線穩(wěn)定，容易成瘤。 

乳腺癌細(xì)胞BT474乳墊原位移植腫瘤及體重生長曲線 

接種細(xì)胞前24小時，體內(nèi)接種雌激素緩釋片，將細(xì)胞以乳墊原位注射的形式接種到C-NKG和NOD-Scid小鼠體內(nèi)，并在不同的時間點測量成瘤體積。細(xì)胞接種量為5~10×10⁶/只，數(shù)據(jù)以Mean±SEM形式呈現(xiàn)。結(jié)果顯示在C-NKG小鼠體內(nèi)腫瘤曲線穩(wěn)定，容易成瘤。 

2. 基于熒光報告基因的轉(zhuǎn)移瘤模型構(gòu)建

乳腺癌細(xì)胞MCF-7-LUC骨腔移植腫瘤活體成像數(shù)據(jù) 

所有小鼠接種前24天體內(nèi)接種新型雌激素藥片。將細(xì)胞乳墊注射的形式接種到C-NKG小鼠體內(nèi)，并在不同的時間點對小鼠進(jìn)行活體成像。細(xì)胞接種量為1×10⁶/只。結(jié)果顯示在C-NKG小鼠體內(nèi)腫瘤曲線穩(wěn)定，動脈注射方式MCF-7細(xì)胞容易在骨腔內(nèi)歸巢。 

乳腺癌細(xì)胞4T-1-LUC骨腔移植腫瘤活體成像數(shù)據(jù)（A. 將細(xì)胞以脛骨骨腔形式接種到BALB/c小鼠體內(nèi)，并在不同的時間點對小鼠進(jìn)行活體成像，細(xì)胞接種量為0.5×10⁶/只；B. 腫瘤轉(zhuǎn)移臟器觀察，觀察到脾臟、肺、腎臟及腦部有肉眼可見的腫瘤瘤塊轉(zhuǎn)移灶；C. 脛骨組織取材后的熒光成像圖片。） 

結(jié)果顯示在BALB/c小鼠體內(nèi)腫瘤曲線穩(wěn)定，4T-1-LUC鼠源三陰性乳腺癌轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，能夠快速轉(zhuǎn)移肺、脾臟、腎臟以及腦部。 

3.基于免疫健全小鼠的Syngeneic模型構(gòu)建

小鼠乳腺癌細(xì)胞4T-1乳墊原位和皮下移植腫瘤及體重生長曲線 

將細(xì)胞以乳墊原位注射的形式接種到BABL/c小鼠體內(nèi)，并在不同的時間點測量成瘤體積。細(xì)胞接種量為0.5~1×10⁶/只，數(shù)據(jù)以Mean±SEM形式呈現(xiàn)。結(jié)果顯示在BABL/c小鼠體內(nèi)腫瘤曲線穩(wěn)定，容易成瘤。