2、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)技巧

（1）細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長狀態(tài)一定要好，取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

（2）胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍，目的為去除細(xì)胞中殘余的血清。

（3）用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個細(xì)胞/支，接種體積為0.1-0.2ml，因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個細(xì)胞/ml，如若有條件的實(shí)驗(yàn)室，也可以加基質(zhì)膠以加速瘤塊的生成，基質(zhì)膠與PBS或無血清的比列為1:1。

（4）細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時內(nèi)完成（如果接種量大，可以分批接種），途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝以保持細(xì)胞的活性。

（5）選擇的裸鼠一般在4-6周齡，體重16-18g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部。

（6）接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散，防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率，并且導(dǎo)致小鼠接種細(xì)胞數(shù)量的差異過大。

（7）接種時，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1cm深，針頭在皮下左右滑動幾次，以便細(xì)胞接種成團(tuán)，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。

（8）如何保定裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。

（9）接種后1-2周左右可以見到皮下開始出現(xiàn)腫塊。

（10）根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤不宜生長過大，一般不要超過2000mm3。

（11）腫瘤大小測量一般為1周兩次，游標(biāo)卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長軸，b為短軸)。

（12）皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。

常見問題及解答

1、這個實(shí)驗(yàn)為什么用裸鼠而不用普通的老鼠或者小白鼠？

裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)用的裸鼠，最大的特點(diǎn)是沒有胸腺等免疫器官，它的免疫力幾乎為零，對腫瘤細(xì)胞沒有免疫作用，易于成瘤。

2、瘤塊長起來又消失？

腫瘤塊先縮小，后變大很常見，很可能是炎癥反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收，繼續(xù)觀察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否經(jīng)過幾周還能長出來，長不起來建議換鼠。

3、是否可以在一只小鼠進(jìn)行多個點(diǎn)接種？

不可以，一只老鼠就只能接種一個點(diǎn)，因?yàn)橐粋€老鼠身上有多個腫瘤塊的情況下，可能會相互影響。

4、腫瘤長不出來是怎么回事？

第一：腫瘤生長周期很慢，一周開始生長腫塊，大約需要1~2個月才能長成腫瘤；

第二：可能是細(xì)胞狀態(tài)差，活力不好，或是腫瘤細(xì)胞不易成瘤，需加入基質(zhì)膠輔助或增大接種量或更換細(xì)胞系；

第三：一方面可能是小鼠周齡太大，或小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠（Nod-scid小鼠）。

5、腫瘤體積相差很大，大小不一？

首先，并不是所有的腫瘤都能夠長得均一形態(tài)。其次，這可能跟小鼠周齡及接種細(xì)胞量不一致導(dǎo)致，建議重新接種。