如何選擇鼠的給藥途徑?操作方法、劑量對比及注意事項
在實驗動物研究中,不同的給藥途徑會影響藥物的吸收、生物利用度和特定實驗的適宜性,研究人員必須熟悉各種途徑,才能以最佳的方式對動物進行給約,得到科學的,合理的實驗結果,下面我們就來聊一聊常用鼠的給藥途徑。
01皮下注射(Subcutaneous Injections, SC)
皮下注射給藥:是將藥液注入皮下結締組織,經(jīng)毛細血管、淋巴管吸收過入血液循環(huán)的方法。在生物醫(yī)學研究中,皮下注射也是一種常見的給藥方式。
該技術通常用于皮膚較薄、皮下組織疏松且血管較少的部位,如頸背部、腋下或大腿內(nèi)側的皮膚。{建議常用部位是鼠兩耳提起后可出現(xiàn)一皮膚凹陷處,在此給藥可確保藥物給在皮下。1
凡是易溶解、無刺激性的藥物以及菌苗、疫苗、細胞等,都可以進行皮下注射。
具體操作步驟:
首先抓取固定小鼠,剃去注射部位毛發(fā)并用酒精消毒,用左手拇指與食指捏起小鼠背部皮膚,右手手持注射器,針頭斜面朝上與皮膚呈30-45"角刺入帳躋狀皮膚,刺入后針頭輕輕左右擺動(易擺動說明已刺入皮下),再輕輕抽吸,如無回血,可緩慢地將藥物注入皮下(推藥過程中能明顯觀察到注射部位鼓起一小包,小包一定時間可消失),注射完拔出針頭后用無菌棉簽壓住進針部位片刻以免藥物外漏。
注射劑量:大鼠一股小于1ml/100g,小鼠一般為
0.1~0.3ml/10g??偹幜?小盤不超過0.5ml,大鼠不超過1ml。
注意事項:
1.正確抓取功物,動物必須受到足夠寬松的抓握,這樣皮膚才能活動起來。2.如果動物要接受多次皮下注射,可交替注射部位。
02皮內(nèi)注射(Intradermal Injections,ID)
皮內(nèi)注射給藥;是將藥液注入皮膚的表皮和真皮之間,用于觀察皮膚血管的通透性變化或皮內(nèi)反應,接種、過數(shù)實驗等。皮內(nèi)注射吸收較慢。皮內(nèi)注射一般選用背部寄柱兩側的皮膚。
具體操作步驟;
固定小鼠后,將注射部位毛發(fā)剃去,局部常規(guī)消毒,左手拇指和食指按住皮膚使之繃緊,在兩指之間進行針頭穿刺,針頭斜面朝上與皮膚呈大約30°角刺入,同時針頭稍被上挑起并稍刺入,將藥液注入皮內(nèi)。注射后皮膚出現(xiàn)小丘疹狀隆起并且比周圍的皮膚白,且皮膚上的毛孔極為明顯。如果注射時感覺比較費力:說明注射正確;如果感覺比較容易,說明已注入皮下,要拔出針頭重新注射。
注射劑量:大鼠一般小于0.1ml/次,小鼠一般小于0.05ml/次。
注意事項:不要回抽注射器。
03 肌肉注射(intramuscular injection,IM)
肌肉注射一般用于有特定給藥方式要求的藥物,或不溶、難溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時可選擇肌肉注射。注射部位一般選拼肌肉豐富、血管較少的臀部。大小鼠后肢處肌肉較少,故一股不進行肌肉注射。
具體操作步驟:
肌肉注射一般在動物麻醉后進行,或者由兩個人操作,一人同定動物,另一人執(zhí)行注射。一般注射部位為大腿內(nèi)側或外側肌肉。酒精消毒注射部位后,左手抓住后肢,右手持針插入肌肉,試著回拍針筒,如有血液或液體回流,表示不適當,需重新插入。確定針頭插入肌肉后,慢慢將藥劑推入,推入的速度應避免太快,以免組織損傷。
注射劑量:大鼠單次注射量一般不要超過0.3ml小鼠單次注射量一般不要超過0.1ml。
注意事項:
1、正確抓取動物,確保動物的一個后戰(zhàn)是自由的,穩(wěn)定地注射。2、針應該垂直于動物的皮膚插入。3、不要注射到后面的肌肉群,因為可能會損傷坐骨神經(jīng)。4、如果小顯要接受多次肌肉注射,要雙腿交替注射。
皮下注射和肌肉注射,藥物主要是經(jīng)皮下和肌肉中的毛細血管吸收:吸收沒有靜脈注射完全,但皮下注射和肌肉注射也成功的避開了胃腸道和肝臟首過代謝。
04 尾靜脈注射(Intravenous Injections, IV)
靜脈注射:一種用注射器將少量或單一種類藥品注射到靜脈,使藥物直接進入血液循環(huán)的一種方式。靜脈注射是效率最高的給藥方式,不需要溶劑的吸收,不存在收過代謝,生物利用率最高??梢酝ㄟ^一次性注射或滴注的方式注射入血管內(nèi)。
大小鼠的導靜脈共有3條,其中民部左右兩側各有一條,背側有一條。因為左右兩側靜脈角質層較薄且易固定,所以常為注射所用。
具體操作步驟:
操作時將小鼠用專門的保定器保定,使其屬部充分暴露,尾部用45-50℃的溫水浸潤半分鐘或用酒精擦拭使血管擴張,并使表皮角質軟化,用左手拇指、食指和無名指捏住并從下面托起墾巴,用無名指和小指夾住尾巴的末梢,右手持注射器使針頭與靜脈平行(小于30°),距鼠尾尖1/4處(約距尾尖2-3厘米)處進計,此處皮薄易于刺入,先緩注少量藥液,如無阻力,無白色皮丘出現(xiàn),表示針頭已進入靜脈,可正式注入藥物。
若推藥無阻力且血管整條會立即由紅變白,推完藥則血管又恢復紅色,用干棉球按壓止血則尾靜脈注射完成。如需反復注射,應從尾部未端開始,逐漸向屈根方向移動。
注射劑量:小鼠單次注射量一般為
0.1~0.2ml/10g。大鼠單次注射量一般為
0.3-0.5ml/100go注意事項:
(1)如阻力較大,或注射時有隆起,則說明注射到了皮下。此時應迅速抽出注射器,輕輕在原注射位點稍上的位置再次注射。
(2)靜脈血管充盈是保證注射成功率的平要因素。一般使用酒精在小鼠尾靜脈部位來回擦拭,由于小鼠雖靜脈很淺靜脈很淺,插入深度不宜超過斜面太多。
(3)注射開始盡可能靠近尾尖(遠心端),如果第一次注射失敗,這樣還有未受損靜脈用來再次注射。
05腹腔注射(Intraperitoneal Injections, IP)
腹腔注射;將藥物注入動物胃腸道漿膜以外、腹膜以內(nèi)的注射方式。腹腔注射作為常用給藥方式的一種,方便易行,吸收快速,一股用于小鼠麻醉、藥物誘導等實驗,一般用于不適宜或經(jīng)胃腸道吸收效率較低的給藥,井且還能對幼鼠進行誘導。
經(jīng)腹腔給藥,藥物吸收速度較靜脈注射慢,但是這種給藥方式可以注射的藥物體積要大于靜脈注射,對于個體較小的實驗動物給藥具有重要意義。
具體操作步驟;
腹腔注射時右手持注射器,左手的小指和無名指抓住小鼠的尾巴,另外三個手指抓住小鼠的頸部,翻轉小鼠使小鼠的頭部向下,腹部向上。這樣由于重力作用,腹腔中的器官就會自然倒向胸部,防止注射器刺入時損傷大腸、小腸等器官。
右手將注射針頭于左下腹部刺入皮下,以45度角穿過腹肌(進針不能太深,感到明顯的穿透感即可,以防刺入臟器;進針后注意回抽,抽回較吃力且僅空氣被回吸則說明過針成功),因定針頭,緩緩注入藥液。進針的動作要輕柔,防止刺傷腹部器官。
注射完后不能立馬抽出針頭,要將針頭在腹腔內(nèi)多停留一段時間,堵住傷口阻止藥物外流,讓藥物隨著臟器蠕動被轉移。
注射劑量:大鼠單次注射量一般為
1.0~2.0ml/100g。小鼠單次注射量一般為
0.1-0.2ml/10g。
注意事項:
1、針頭刺破腹肌后會有落空感,此時針頭已進入腹腔,應停止進針以免針頭刺入過深損傷內(nèi)臟。
2、為避免傷及內(nèi)臟,應使動物處于頭低位,使內(nèi)臟移向上腹。
3、對于體重較小的小鼠,腹腔注射時針頭可以在腹部皮下穿行一小段距離,最好是從腹部一側進針,穿過腹中線后在腹部的另一側進入腹腔,注射完藥物后,緩緩拔出針頭,并輕微旋轉針頭,防止漏液。
小鼠尾靜脈注射對初學者來說,可能有一定難度,但注射是否成功容易判斷,不會對實驗結果造成影響。而腹腔注射雖然看似簡單,但如果操作不當,很容易造成注射失敗,并不被發(fā)現(xiàn),直接影響到實驗結果。
06經(jīng)口給藥法
對于實驗動物來說,常用的口服給藥方式包括直接口服(將藥物混入水或飼料中,動物自己覓食)和被動口服給藥(灌霄)。
口服給藥是將藥物混于飼料或溶于飲用水中,讓動物自由攝取。此方法優(yōu)點是操作簡單方使,缺點是藥物劑量不能保證準確:因動物個體差異,采食量有差異,藥量難以精準控制,不能客觀反應實驗結果,故此法應用較少。
灌胃給藥是指借助器械(灌霄針)將藥物溶液或混懸液直接灌入動物胃內(nèi)。此法操作簡便,可以實現(xiàn)精準給藥,靈活控制給藥劑量,也能很好的模擬臨床中藥物經(jīng)口服后的一些列體內(nèi)作用,因此成為動物給藥眾多方法中被大家廣泛認可的技術之一,作為一個科研工作者必須熟練掌握
灌青給藥看似簡單,實則大有學問,操作如果手法不當很容易導致內(nèi)容物進入氣道或傷到食道,進而引起動物死亡,導致實驗失敗。接下來一起來看看灌胃給藥注射技巧:
操作步驟(以小鼠為例):
(1)灌胃前將動物禁食4~8小時,避免太多胃內(nèi)容物阻礙灌胃注射以及影響藥物吸收速率,同時也可避免動物灌青后嘔吐。
(2)選用合適型號的灌胃針與合適量程的注射器,組合成灌胃器,并吸取一定的藥液,放在一關備用。
灌胃針的尖端有一個中空的金屬球,目的是防止針頭刺入氣管或劃傷消化道。所需的長度應需要從舉起動物的聯(lián)角開始測量,灌胃針的球頭應達到動物最后一根肋骨。以避免插入胃管時插入過深造成動物冒的傷害,或是插入過淺使灌注物無法達到胃部。
(3)將小鼠固定成垂直體位,使其頭、頸、身體成一條直線。具體方法如下:右手拉住小鼠尾巴,左手的拇指、食指和中指揪住小園背部及頸部皮膚將動物固定,另外小指和無名壓住小鼠的尾巴即可。(注意要固定牢不能讓其亂動,且對頸部皮膚不宜拉得太緊,以免使其發(fā)生窒息。若抓取不得當,切記要放開重抓,以免后續(xù)操作出問題。)
(4)抓取好小鼠后即可灌青。具體方法如下:右手持注射器將灌霄針沿嘴角輕輕插入口中,用灌崗針壓住舌頭,抵住上顎,使口腔和食道成一條直線,再沿咽后壁徐徐插入食管(針插入時應無阻力,會有一種刺空感),若感到阻力或動物掙扎時,應拔出重插,以免損傷或穿破食管以及誤入氣管。
刺激小鼠引起吞咽動作,順勢迅速將灌胃計插入約3-4cm,將藥液注入。如動物無呼吸異常,無掙扎嘔吐,則證明灌胃針已進入胃內(nèi)。
(5)灌肯結束后輕柔的拔出灌胃針,觀察是否有漏液并關注小鼠健康狀態(tài)。如無呼吸異常,可確定灌胃成功。
操作要點與注意事項:
由于小鼠的氣管靠近食管,在灌胃過程中需要注意避免藥物進入氣管導致小鼠窒息死亡。只能夠對被抓取的、清醒的動物進行灌胃,麻醉或鎮(zhèn)靜會增加誤吸的風險(物質無意中進入肺部)
小丑的固定非常重要,盡量保持動物的舒適度以及實驗人員操作的便利性,以避免在洲胃過程中動物因為姿勢不適而掙扎,造成灌胃失敗。
在灌注過程中功物,如出現(xiàn)嗆口、嘔吐或強烈掙扎等現(xiàn)象,應立即停止灌注,拔出灌青針重新進行灌霄。推注過程要緩慢均勻,如注射量較大,應當采取間歌注射,即注射一定量后停頓一下再繼續(xù)。
灌胃針不可插入過深,一般插入小鼠34cm,大鼠4-6cm后即可注入藥物;
灌胃體積常為0,1-0,2ml/10g,過度的灌胃量易引起小日不適甚至死亡。常用灌胃量:小阻0.1
0.8ml,大鼠1-3ml。07其它途徑給藥方法
下面介紹幾種特殊給藥方式,一般用于有特殊要求的研究中。
(一)口鼻給藥
在造哮喘與肺動脈高壓等模型時常用到鼻滴作為給藥途徑。具體操作步驟:
所需工具:移液搶及槍頭,藥品,沾有乙鍵的棉球,50ml離心管(1)首先用移液槍吸取藥物待用。(滴身的藥液盡量濃縮,每次消息量建議在200ul以內(nèi))(2)將小鼠放入有乙醚棉球的離心管中,待小鼠失去自主活動后,將小鼠拿出左手抓取固定小鼠,右手持移液器將藥物慢慢滴到小鼠鼻孔上,待小鼠吸入鼻腔(注意藥劑會消失在鼻孔里),每次藥液應無菌且量不多。(3)重復上述操作,直到所需的量完成為止。(4)滴鼻完成后,將小鼠保持滴鼻的姿勢一段時間,防止藥液流出影響實驗數(shù)據(jù)可靠性。
注意事項:
·滴鼻時應綠逮滴下,一定要等到小鼠將前一滴藥液吸入后,再開始滴往下一滴;
·滴注時需做到少量多次,速度太快易引起小鼠死亡;
,藥液需要無菌,避免引起肺部感染;
(二)皮膚給藥
皮膚給藥主要用于研究藥物或毒物經(jīng)過皮膚的吸收效果和對皮膚的局部作用、致敏作用和光感作用等:
大小鼠主要采用浸尾的方式進行皮膚給藥,以此來定性地判斷藥物經(jīng)皮吸收作用。具體操作:將動物放入固定器內(nèi)(如大小鼠的尾靜脈固定器),露出民巴,將鼠尾浸入藥液(可在特定通風櫥內(nèi)操作),一定時間后觀察其藥物反應。對于有揮發(fā)性的有毒物質要設法將鼠尾放于密封容器內(nèi),并置于通風構內(nèi),同時實驗人員應佩戴防毒面罩,做好防護。
兔和豚鼠常采用背部一定面積的皮膚脫毛后,將一定的藥液涂在皮膚上,藥液經(jīng)皮膚吸收。
(三)腦內(nèi)給藥
腦內(nèi)給藥應用較少,一般用于特定藥物的特定給藥方式及一些特殊實驗(如帕金森造模)。成年大小鼠顱骨較硬,注射前需進行顱腦開商手術,常使用腦定位注射儀進行注射;幼鼠可用言刺法進行注射,大致操作是先將動物麻醉,用酒精對動物顱部進行擦拭消毒,左手對動物頭部進行筒單固定,在兩耳連線和兩眼前緣連線的中問部位確定位置,右手手持注射器,直接中部位置垂直刺入硬腦膜下,進針大約2-3mm,緩慢注入藥物即可,注射完畢酒精消毒局部。
這么多給藥方法,在實際研究中,我們該如何選擇呢?
(1)多卷照所開發(fā)藥物擬采用的臨床給藥方式并結合適應癥(如靜脈和腹腔注射的吸收速度快,適合急癥處理)來選擇。從新藥研發(fā)角度來說,能口服最好,因為口服給藥是最方便、經(jīng)濟、安全的方式。
(2)根據(jù)實驗目的選擇;如你要研究口服生物利用度就選用動物灌胃給約,要研究腹腔給藥生物利用度就采用腹腔給藥方式。
(3)主要考慮藥物的溶解性,穩(wěn)定性及毒性等。
①口服給藥;適用的藥物劑型比較多,只要保證藥物是均勻且穩(wěn)定的就可以。如功物體內(nèi)胃腸道是有一定pH值的,有的區(qū)段酸性會很強,如果該藥物具有體內(nèi)pH不穩(wěn)定性就應該選擇口服以外的給藥方式。如果發(fā)現(xiàn)藥物口服具有腸毒性時,就可以考慮選擇靜脈等其他給藥方式。
②靜脈給藥:對藥物劑型要求比較高,需完全溶解的溶液或者藥物顆粒比紅細胞小的多的體系,因此不溶的劑型是不能考慮靜脈注射的。
①腦內(nèi)給藥和皮下注射:腦內(nèi)和皮下給藥量很小,需結合給藥量。如同樣的給藥劑量下,腦內(nèi)注射和皮下注射配制的藥物濃度就要高一些,需要考慮到藥物溶解性是否滿足要求。
(4)技術難度,如長周期的靜脈注射給藥難以操作時,可考慮選擇生物利用度比靜脈差一點又好操作的腹腔給藥來進行實驗。
不同給藥方式之間劑量換算估值如下表:
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